In Hitman: Blood Money neem je de rol van de beroemde huurmoordenaar Agent 47 op je. Wanneer alle collega's van de ICA systematisch worden vermoord, gaat Agent 47 op onderzoek uit in Amerika. Je bezoekt steden zoals Las Vegas, New Orleans, Los Angeles en Mississippi.
De game engine is verbeterd. Je kunt nu ongelukken veroorzaken, zoals een kroonluchter op iemands hoofd laten vallen. Er zijn nieuwe manieren om lichamen kwijt te raken en de kunstmatige intelligentie is verbeterd. Slachtoffers en concurrerende huurmoordenaars zijn slimmer, en je kunt zelf het doelwit worden.
Met het nieuwe Blood Money System verdien je geld met elke opdracht. Dit geld kun je gebruiken om de pers om te kopen of je wapens te verbeteren.