In Assassin's Creed - Brotherhood keert Ezio terug. Hij vecht tegen de machtige Tempeliers in Rome, een stad vol macht, hebzucht en corruptie. Om alle tirannen te verslaan, moet Ezio een broederschap opbouwen en leiden.
Voor het eerst in de serie heeft het spel een multiplayer-modus. Je kunt spelen als een Tempelier of een Assassijn en proberen je doelwit te elimineren zonder dat ze het doorhebben.